Expresión génica de ligandos mica, micb y ulbp (1-6) del receptor NKG2D de células natural killer y metaloproteinasas adam10, adam17 y mmp14 en lineas celulares de cáncer de cervical / Gene expression of mica, micb and ulbp (1-6) ligands of the NKG2D receptor of natural killer cells and metalloproteinases adam10, adam17 and mmp14 in cells lines of cervical cancer

RESUMEN El CCU es la segunda causa de muerte en mujeres de nuestro país. Dentro de los primeros mecanismos de defensa del hospedero se encuentra la respuesta inmune de las células NK y su función lítica a expensas de su receptor activador NKG2D, el cual posee como ligandos mica, micb y ulbp (1-6), los cuales se expresan en células transformadas y/o infectadas por virus. Uno de los mecanismos de evasión por parte de la célula tumoral es el clivaje de estas proteínas a través de metaloproteinasas como adam10, adam17 y mmp14. Se analizó la expresión de estos ligandos y metaloproteinasas mediante PCR tiempo real, en lineas celulares de referencia para cáncer cervical como HeLa (positiva para VPH-18) y C33A (negativa para VPH). Se obtuvieron valores representativos de expresion relativa genica con diferencias significativas asi: mmp14 en linea HeLa (p= 0.006); y mica y ulbp-3 en la linea C33A (p= 0.020 y p=0.003 respectivamente). Por lo tanto, se podría sugerir que la expresión de mmp14 se encuentra posiblemente involucrados con la presencia de VPH causante del cancer cervical y la respuesta inmunne innata desarrollada.

ABSTRACT Cervical cancer is the second leading cause of death in women in our country. Within the first host defense mechanisms is the immune response of NK cells and their lytic function at the expense of its NKG2D receptor activator which has as ligands mica, micb and ulbp (1-6), which are expressed in transformed cells and / or virally infected. One of the mechanisms of evasion by the tumor cell is the cleavage of these proteins through metalloproteinases as adam10, adam17 and mmp14. We analyzed the expression of these ligands and metalloproteinases by real time PCR, in reference to cell lines HeLa cervical cancer (positive for HPV-18) and C33A (negative for HPV). We obtained representing relative gene expression with significant differences from the other lines of study as follows: mmp14 in HeLa (p = 0.006); and mica and ulbp-3 in C33A (p = 0.020 and p = 0.003 respectively). Thus one might suggest that the expression of mmp14 is possible involved with HPV presence causing high risk of cervical cancer and innate inmunne response developed.

Expresión de EDNRB y CDX2 posibles biomarcadores en progresión al cáncer cervical / EDNRB and CDX2 expression as possible biomarkers in progression to cervical cancer

RESUMEN De acuerdo a la historia natural del cáncer del cuello uterino, en donde las lesiones preneoplásicas de bajo y alto grado pueden presentar fenómenos de regresión o progresión, existe gran interés en la búsqueda de biomarcadores que permita predecir la evolución de las lesiones preneoplásicas del cérvix hacia la progresión o regresión de la enfermedad. Estos biomarcadores pudieran ser de origen genético, o epigenético que alteren la expresión de los genes y que pudieran estar asociados con la carcinogénesis en diferentes tipos de tejido humano. El objetivo del estudio fue analizar la expresión del mARN de los genes SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 y HAND1 en muestras negativas para lesiones intraepiteliales cervicales (n=9), muestras con lesiones intraepiteliales de bajo grado (n=10) y alto grado (n=11). Se realizó análisis de expresión de los genes mencionados mediante qRT-PCR y el análisis de los datos se realizó mediante la prueba no paramétrica de ANOVA. La diferencia estadística se determinó en valores p< 0,05. Para los genes EDNRB y CDX2 se observó disminución 66,7% en las muestras sin alteraciones histológicas cervicales, comparado con una disminución en la expresión del 50% en muestras con LIEBG y para el grupo de LIEAG del 36,4% para el gen EDNRB y del 27,3% para el gen CDX2 dando una diferencia estadísticamente significativa p= 0,02. Sugiriendo que EDNRB y CDX2 podrían ser útiles como posibles biomarcadores en la carcinogénesis cervical.

ABSTRACT According into account the natural history of cervical cancer, where low- and high-grade preneoplastic lesions may present regression or progression phenomena, there is great interest in the search for biomarkers to predict the behavior of preneoplastic lesions of the cervix. These biomarkers may be of genetic origin, or epigenetics that alter the expression of genes and that may be associated with carcinogenesis in different types of human tissue. The objective of the study was to analyze the expression of the mRNA of the SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 and HAND1 genes in samples negative for cervical intraepithelial lesions (n = 9), low grade intraepithelial lesions (n=10) and high grade (n = 11). Expression analysis of the mentioned genes was performed using qRT-PCR and data analysis was performed using the non-parametric ANOVA test. The statistical difference was determined in values p <0.05. For the EDNRB and CDX2 genes, a 66.7% decrease was observed in the samples without cervical histological alterations, compared to a decrease in expression of 50% in LIEBG samples and 36.4% in the LIEAG group for the EDNRB gene And 27.3% for the CDX2 gene giving a statistically significant difference p = 0.02. Suggesting that EDNRB and CDX2 could be useful as potential biomarkers in cervical carcinogenesis.

Presence and count of S. mutans in children with dental caries: before, during and after a process of oral health education

Dental caries is an infectious, multifactorial, localized, transmissible process that leads to the destruction of hard dental tissue. Streptococcus mutans is considered to be the main microorganism associated with its development. The aim of this study was to determine presence and count of S. mutans in saliva samples from children with dental caries before and after an educational process including interviews, lessons, lectures, educational workshops and recreational activities on the importance of oral care and hygiene. Twentythree 3 to 6 year old schoolchildren provided 3 unstimulated saliva samples: one before the educational process, one at 3 months and one at 6 months into the educational process. The samples were serially diluted and plated on Mitis Salivarius agar supplemented with bacitracin and 20% sucrose, and incubated anaerobically for 2 days at 37oC. Presumptive S. mutans isolates were identified with biochemical tests. Before the beginning of the educational process, and at 3 and 6 months into the educational process, S. mutans was found, respectively, in 22 (95.6%), 15 (65.2%) and 10 (43.5%) of the 23 children. The S. mutans count was reduced by 64.8% and 86.6% at 3 and 6 months, respectively, compared to the levels found before the educational process. These results indicate that educational intervention produced a significant reduction in S. mutans levels in the saliva of children with dental caries at 3 and 6 months into the educational process (AU)

La caries dental es un proceso infeccioso multifactorial, localizado y transmisible que se caracteriza por la destrucción del tejido dental duro. Streptococcus mutans es considerado el principal microorganismo asociado al desarrollo de esta enfermedad. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia y recuento de S. mutans en saliva de niños con caries dental antes y después de un proceso educativo. Con este fin se tomó saliva no estimulada de 23 niños con caries dental pertenecientes a un centro educativo con edades de 3 a 6 años. En todos los niños se tomaron 3 muestras de saliva: antes del proceso educativo y a los 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo. El proceso educativo consistió en entrevistas, enseñanzas, conferencias, talleres educativos y actividades lúdicas sobre la importancia del cuidado e higiene oral. Después de su recolección, las muestras de saliva fueron serialmente diluidas y sembradas en Agar Mitis Salivarius con bacitracina y sacarosa al 20%. Los medios de cultivo sembrados se incubaron en anaerobiosis durante 2 días a 37ºC y los aislamientos presuntivos de S. mutans se identificaron con pruebas bioquímicas. Antes del inicio del proceso educativo, a los 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo se encontró S. mutans, respectivamente, en 22 de los 23 niños (95.6%), en 15 de los 23 niños (65.2%) y en 10 de los 23 niños (43.5%). En cuanto al recuento de S. mutans, se encontró una reducción de 64.8 % y 86.6% a los 3 y 6 meses, respectivamente, en comparación a los niveles encontrados antes del inicio del proceso educativo. En conclusión, los resultados indican que la intervención educativa realizada produjo una reducción significativa en los niveles de S. mutans en saliva de niños con caries dental después de 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo (AU)

Genotipificación, niveles de expresión y estado físico del virus del papiloma humano en pacientes colombianos con cáncer de células escamosas en la cavidad oral / Genotyping, levels of expression and physical status of human papilloma virus in oropharyngeal squamous cell carcinoma among Colombian patients

Introducción. Uno de los factores de riesgo del carcinoma de células escamosas en la cavidad oral es la infección por el virus del papiloma humano (HPV), cuyas prevalencias dependen de la región geográfica. Objetivo. Identificar los tipos del virus del papiloma humano más frecuentes en el cáncer de la cavidad bucal, sus niveles de expresión y el estado físico del genoma viral. Materiales y métodos. Se seleccionaron 46 pacientes que asistían a los servicios de cirugía de cabeza y cuello en Bogotá, Manizales y Bucaramanga. El examen histopatológico de las muestras incluidas en el estudio demostró la presencia de carcinoma de células escamosas en la cavidad oral en todas ellas. Se extrajo el ADN para genotipificar el virus y determinar el estado físico de su genoma, y el ARN para determinar los transcritos virales mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Resultados. La prevalencia del virus del papiloma humano en los tumores fue de 21,74% (n=10) y el tipo viral más frecuente fue el HPV-16 (nueve casos). La expresión viral del HPV-16 fue baja (una de 11 copias) y el estado físico predominante fue el mixto (ocho casos), con prevalencia de la disrupción en el sitio de unión de E1 y E2 (2525 a 3720 nucleótidos). Conclusión. En los pacientes con carcinoma de cavidad oral incluidos en este trabajo, la frecuencia del virus del papiloma humano fue relativamente baja (21,7 %) y el tipo viral más frecuente fue el HPV-16, el cual se encontró en forma mixta y con baja expresión de E7 , lo cual puede ser indicativo de un mal pronóstico para el paciente.

Introduction: One of the risk factors for squamous cell oropharyngeal carcinoma is infection with the human papilloma virus (HPV), with prevalences that vary depending on the geographical region. Objective: To identify the most frequent HPV viral types in oropharyngeal cancer, the levels of expression and the physical condition of the viral genome. Materials and methods: Forty-six patients were included in the study from among those attending head and neck surgical services in the cities of Bogotá, Manizales and Bucaramanga. In the histopathological report all study samples were characterized as oropharyngeal squamous cell carcinoma. DNA extraction was subsequently performed for HPV genotyping and to determine the physical state of the viral genome, as well as RNA to determine viral transcripts using real-time PCR. Results: HPV prevalence in tumors was 21.74% (n=10) and the most common viral type was HPV-16 (nine cases). Viral expression for HPV-16 was low (one of 11 copies) and the predominant physical state of the virus was mixed (eight cases), with disruption observed at the E1 - E2 binding site (2525 - 3720 nucleotides). Conclusion: The prevalence of HPV associated with oropharyngeal carcinoma among the Colombian study population was 21.7%, which is relatively low. The most frequent viral type was HPV-16, found in a mixed form and with low expression of E7 , possibly indicating a poor prognosis for these patients.

Biotipos y susceptibilidad antimicrobiana de S. mutans en niños con y sin caries dental / Biotypes and antimicrobial susceptibility of S. mutans in children with and without dental caries

Objetivos: investigar los biotipos de S. mutans aislados de niños con y sin caries dental y determinar su susceptibilidad antimicrobiana. Métodos: este estudio observacional descriptivo incluyó 206 niños entre los 3 y 5 años de dos preescolares en Bogotá, D. C., Colombia. Después de su aislamiento en agar Mitis Salivarius Bacitracina, las cepas S. mutans se identificaron por pruebas bioquímicas y se biotipificaron por el sistema api-ZYM. En todos los aislamientos se determinó por el método de dilución en agar la concentración inhibitoria mínima (CIM) de Penicilina, Amoxicilina, Cefazolina, Eritromicina, Clindamicina, Imipenem, Vancomicina y Teicoplanina. Resultados: Se encontró S. mutans en 30 de los 79 niños sin caries dental (38%) y en 56 de los 127 niños con caries (44,1%). Los niños con caries presentaron un recuento superior de S. mutans en comparación con los niños sin caries (p < 0,05). En total se identificaron 121 cepas de S. mutans en los 86 niños: 43 cepas en los 30 niños sin caries dental y 78 en los 56 niños con caries dental. Las 121 cepas fueron agrupadas en 38 biotipos: 24 en el grupo de caries y 14 en el grupo sin caries. En el grupo de caries los biotipos más frecuentes fueron el XV, XI, XII y XVII, respectivamente, con 26, 12, 11 y 4 cepas y en el grupo sin caries los biotipos más frecuentes fueron el XXVI, XX y XXXVI, respectivamente, con 14, 8 y 7 cepas. Todos los biotipos fueron altamente sensibles a los antimicrobianos evaluados; el 50 y 90% de las cepas S. mutans fueron inhibidas, respectivamente, por concentraciones menores a 0,12 y 1 µg/ml para todos los antimicrobianos estudiados. Para la penicilina, eritromicina e imipenem se obtuvieron los valores promedios más bajos de CIMs. Conclusiones: en la población objeto de estudio se encontró una gran diversidad biotípica, los aislamientos fueron altamente susceptibles a los antimicrobianos evaluados y en cada grupo de pacientes se identificaron patrones únicos que podrían indicar una colonización específica.

Objectives: The main objective was to investigate the biotypes of S. mutans isolated from children with and without dental caries and determine its antimicrobial susceptibility. Methods: this descriptive observational study included 206 children aged 3 to 5 years of two preschool institutions in Bogota-Colombia. After isolation on agar Mitis Salivarius Bacitracin, S. mutans strains were identified by biochemical tests and biotyped by the api-ZYM system. The minimal inhibitory concentrations (MICs) of the S. mutans isolates were evaluated against penicillin, amoxicillin, cefazolin, erythromycin, clindamycin, imipenem, vancomycin and teicoplanin by an agar dilution method. Results: S. mutans was found in 30 of the 79 children without dental caries (38%) and in 56 of the 127 children with caries (44.1%). Children with cavities had a higher count of S. mutans compared to children without caries (p < 0.05). A total of 121 strains of S. mutans were identified in 86 children: 43 strains in 30 children with dental caries and 78 in the 56 children with dental caries. The 121 strains were grouped into 38 biotypes: 24 in the group caries and 14 in the group without caries. In the group caries the most common biotypes were the XV, XI, XII and XVII, respectively, with 26, 12, 11 and 4 strains and the group caries the most common biotypes were the XXVI, XX and XXXVI, respectively, with 14, 8 and 7 strains. All biotypes were highly sensitive to all antimicrobials tested; 50 and 90% of S. mutans strains were inhibited by using concentrations lower than 0.12 and 1 µg/ml, respectively, for all antibiotics studied. The lowest MICs average values were obtained for penicillin, erythromycin and imipenem. Conclusions: In the study population a wide variety of biotypes was found, isolates were highly sensitive to antimicrobials evaluated and in each clinical group were identified unique patters that could indicate a specific colonization.

Medición de la citotoxicidad y producción de citocinas en fibroblastos gingivales humanos estimulados con Mercurius-Heel®S: Un estudio piloto / Cytotoxicity measurement and cytokine production in human gingival fibroblasts stimulated with Mercurius-Heel®S: Pilot Study / Medição de citotoxidade e produção de citocinas em fibrobastos gengivais humanos estimulados com Mercurius-Heel®®S: Estudo piloto

El Mercurius-Heel®S es un medicamento homeopático utilizado para tratar patologías infecciosas como la gingivitis y la periodontitis; principalmente de la cavidad oral. El componente principal de este medicamento es el Mercurius solubilis. Se estableció el efecto citotóxico a través de la viabilidad celular o antiinflamatorio por medición de citocinas del Mercurius-Heel®S sobre fibroblastos gingivales humanos (FGH). Las células fueron tratadas con Mercurius-Heel®S a concentraciones desde 300 mg/ml hasta 0.0005 mg/ml y como control, células sin tratamiento. La viabilidad celular fue medida mediante la prueba colorimétrica MTS® y la expresión de citocinas (IL1b, TNFa e IL10) presentes en sobrenadantes celulares, fue realizada con Quantiquine® ELISA. Se observó incremento de la viabilidad celular significativamente mayor con respecto al control (concentraciones bajas del medicamento) a partir de 3,7 mg/ml hasta 0.0005 mg/ml. La producción de citocinas no mostró diferencias significativas a diferentes concentraciones de Mercurius-Heel®S. No se evidenció incremento significativo de IL1b, IL10 y TNFa y el Mercurius-Heel®S no mostró efecto citotóxico sobre FGH.

Mercurius-Heel®S is a homeopathic remedy used to treat infectious diseases such as gingivitis and periodontitis, mainly in the oral cavity. The main component of this drug is the Mercurius solubilis. Its cytotoxic effect was established based on cell viability and its anti-inflammatory effect by measuring the cytokines Mercurius-Heel®S on human gingival fibroblasts (FGH). We treated cells with Mercurius-Heel®S at concentrations of 300 mg/ml to 0.0005 mg/ml and left untreated cells as a control. Cell viability was measured using the MTS® colorimetric assay and the expression of cytokines (IL1b, TNFa e IL10) present in cell supernatants was performed with Quantiquine® ELISA. From 3.7 mg/ml to 0.0005 mg/ml, we observed a significantly higher increase in cell viability in comparison to the control (lower concentrations of the drug). Cytokine production was not significantly different at different concentrations of Mercurius-Heel®S. There was no significant increase in IL1b, IL10 and TNFa and Mercurius-Heel®S showed no cytotoxic effect on FGH.

Mercurius-Heel®S é um medicamento homeopático utilizado para tratar patologías infecciosas como la gengvite e a periodontite; principalmente da cavidade oral. O componente principal deste medicamento é o Mercurius solubilis. Estabeleceu-se o efeito citotóxico através da viabilidade celular a anti-inflamatório por medição de citocinas do Mercurius-Heel®S sobre fibroblastos gengivais humanos (FGH). As células foram tratadas com Mercurius-Heel®S a concentrações desde 300 mg/ml até 0.0005 mg/ml e como controlo, células sem tratamento. A viabilidade celular foi medida a prova colorimétrica MTS® e a expressão de citocinas (IL1b, TNFae IL10) presentes em sobrenadantes celulares, foi realizada com Quantiquine® ELISA. Observou-se incremento da viabilidade celular significativamente maior com respeito ao controlo (concentrações baixas do medicamento) a partir de 3,7 mg/ml até 0.0005 mg/ml. A produção de citocinas não mostrou diferenças significativas a diferentes concentrações de Mercurius-Heel®S. Não se evidenciou incremento significativo de IL1b, IL10 e TNFa e o Mercurius-Heel®S não mostrou efeito citotóxico sobre FGH.

Occurrence of Porphyromonas gingivalis and its antibacterial susceptibility to metronidazole and tetracycline in patients with chronic periodontitis

La periodontitis crónica es una enfermedad infecciosa multifactorialasociada a bacilos Gram-negativos anaeróbicos estrictos que se encuentran inmersos en la biopelícula subgingival. Porphyromonas gingivalis, importante patógeno periodontal, es frecuentemente detectado en pacientes con periodontitis crónica. Los aislamientos clínicos de P. gingivalis tienden a ser susceptibles a la mayoría de agentes antimicrobianos; sin embargo, se tiene poca información sobre la susceptibilidad antimicrobiana invitro. El objetivo de este estudio fue determinar la frecuencia de P. gingivalis en pacientes con periodontitis crónica y determinar la susceptibilidad antimicrobiana en términos de concentración inhibitoria mínima (CIM) de los aislamientos clínicos a metronidazol y tetraciclina. Se realizó un estudio observacional descriptivo enel que se incluyeron 87 pacientes con periodontitis crónica. Las muestras tomadas con conos de papel de la bolsa periodontal se depositaron en caldo tioglicolato, se incubaron durante 4 horas a 37 oC en anaerobiosis y se resembraron en agar anaeróbico Wilkins-Chalgren (Oxoid). La identitficación de los aislamientos serealizó con el sistema RapIDTM ANA II (Remel) y la susceptibilidadantibiótica para metronidazol y tetraciclina se evaluó mediante la técnica M.I.C.Evaluator (M.I.C.E., Oxoid). En 30 de los 87 pacientes con periodontitis crónica se identificó P. gingivalis, lo que representa una frecuencia de 34.5 por ciento. Todos los 30 aislamientos (100 por ciento) fueron sensibles al metronidazol con valores de CIM desde 0.015 hasta 4 ug/ml. En cuanto a tetraciclina, 27 aislamientos(90 por ciento) fueron sensibles con valores de CIM desde <0.015 hasta4 ug/ml; los restantes 3 aislamientos (10%) fueron resistentes a tetraciclina con valores de CIM de 8 ug/ml. En cuanto a edad, género, profundidad de bolsa, nivel de inserción clínico y severidad de la periodontitis no se presentaron diferencias estadísticamentesignificativas

Efecto del Mercurius-Heel®s sobre la citotoxicidad de fibroblastos gingivales humanos en un modelo in vitro / Effect of Mercurius-Heel®s on the cytotoxicity of human gingival fibroblasts in an in vitro model

La enfermedad periodontal es una patología de origen infeccioso, caracterizada por ocasionar secuelas destructivas al tejido de soporte del diente, y cuyo tratamiento va encaminado a la destrucción de los agentes etiológicos y a la regeneración periodontal. Una alternativa es el uso de agentes homeopáticos ya que son naturales y se administran a muy bajas concentraciones, uno de ellos es el Mercurius Heel® S como coadyuvante en enfermedades infecciosas. En este trabajo se presentan los resultados de una investigación cuyo objetivo fue evaluar el efecto del Mercurius Heel® S en la viabilidad de fibroblastos gingivales humanos, que fueron sometidos a tratamiento con Mercurius Heel® S durante 15 minutos y dos horas a concentraciones desde 300mg hasta 0.00006mg. Transcurridos esos tiempos, se retiró el tratamiento y las células fueron mantenidas durante 24, 48 y 72 horas más. Posteriormente se realizó un ensayo colorimétrico de viabilidad y proliferación celular denominado MTS de promega® Los fibroblastos gingivales humanos tratados con Mercurius Heel® S mostraron un aumento en la proliferación celular comparada con las células no tratadas. Bajas concentraciones del medicamento 0,0001mg y 0,00006mg mostraron una mayor proliferación observando diferencias estadísticamente significativas. El tratamiento a 15 minutos mostró mejores resultados con respecto al tratamiento de 2 horas con diferencias estadísticamente significativas también. Finalmente el efecto del Mercurius Heel® se mantuvo hasta las primeras 48 horas. Considerando lo anterior, el Mercurius Heel® no presentó ningún efecto citotóxico en los fibroblastos gingivales; por el contrario, las células proliferaron, lo que sugiere su utilidad como tratamiento complementario en la enfermedad periodontal.

Periodontal disease is pathology of infectious origin, characterized because it causes destructive consequences to the supporting tissue of the tooth, its treatment is aimed at the destruction of the etiologic agents and to the periodontal regeneration. An alternative is the use of homeopathic agents because they are natural and are managed to very low concentrations, one of them is the Mercurius Heel ® S as an adjunctive therapy in infectious diseases. In this work, we present the results of an investigation whose objective was to evaluate the effect of Mercurius Heel® S on the viability of human gingival fibroblasts, which were undergoing treatment with Mercurius Heel® S for 15 minutes and two hours to concentrations from 300mg to 0.00006mg. After these times, the treatment was removed and the cells were maintained for 24, 48, and 72 more hours. It was followed by a colorimetric assay for cell viability and proliferation called MTS of Promega ®. Human gingival fibroblasts treated with Mercurius Heel® S showed an increase in cell proliferation compared with the untreated cells. Low medication concentrations of 0.0001 mg and 0.00006 mg showed a greater proliferation showed greater statistically differences. Finally, the effect of Mercurius Heel® was maintained for the first 48 hours. Considering the above, the Mercurius Heel® did not provide any cytotoxic effect on human gingival fibroblasts; on the contrary, the cells proliferated, suggesting its usefulness as supplementary treatment for periodontal disease.

Presence and antimicrobial profile of Gram-negative facultative anaerobe rods in patients with chronic periodontitis and gingivitis

La periodontitis crónica es una enfermedad infecciosa multifactorial hacen parte de la microflora subgingival. En los últimos años se han realizado estudios para valorar la presencia de bacilos Gramnegativos anaerobios facultativos (enterobacterias) y suimportancia en el desarrollo y rogresión de la periodontitis crónica. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis crónica y gingivitis y conocer la susceptibilidad antimicrobiana de los aislamientosclínicos. Se realizó un estudio observacional y descriptivo en elque se incluyeron 64 pacientes con periodontitis crónica y 22 pacientes con gingivitis. Las muestras tomadas en el surco gingival con conos de papel se depositaron en caldo tioglicolato, seincubaron durante 4 horas a 37 oC y se resembraron finalmente en Agar MacConkey. En la identificación de las bacterias se utilizó el sistema API-20E (Biomerieux, France) y la susceptibilidadantimicrobiana se realizó por el método de difusión en disco. En los dos grupos se identificaron 29 especies enterobacterianas, 7 en el grupo con gingivitis y 22 en el grupo con periodontitis crónica. En el grupo de periodontitis crónica las especies masfrecuentes fueron: K. oxytoca n=5, S. liquefaciens n=4 y K.pneumoniaey E. coli con n=3. En el grupo con gingivitis, Erwiniasp tuvo la mayor frecuencia (n=2). Los aislamientos clínicos presentaron níveles muy bajos de sensibilidad a los B-lactamicosampicilina y amoxicilina/ ac.clavulanico, 17.2 y 27.6 por ciento, y la mayor sensibilidad a ciprofloxacina. En conclusión, la alta frecuencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis debe conducir a la prevención y a desarrollar terapias mecánicas y antimicrobianas en las cuales se tengan en cuenta, como parte del tratamiento periodontal, los perfiles antimicrobianos reportados.

Detection of gene amplification in MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, AKT2, and human papilloma virus in samples from cervical smear normal cytology, intraepithelial cervical neoplasia (CIN I, II, III), and cervical cancer / Detección de amplificación en los genes MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 y del virus de papiloma humano en muestras de cepillado cervical en mujeres con citología normal y con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II, III y cáncer de cuello uterino

Introduction: Cervical cancer is the second most common cancer among women worldwide and the second cause of cancer mortality in women. It has been demonstrated that the process of cervical carcinogenesis displays genetic and environmental epigenetic components. Currently, research is focused on new prognosis markers like oncogene amplification.Objectives: To perform detection of MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, and AKT2 amplification. Additionally, to detect human papillomavirus in samples from normal cytology smear, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, II, and III and cervical cancer patients.Methods: Papillomavirus (HPV) genotyping by reverse line blot (RLB) performed and gene amplification by detection with real-time PCR with Taqman probes.Results: HPV was present in 4% of the patients with normal cytology, 48% in CIN I, 63.6% in CIN II, 64% in CIN III, and 70.8% in cervical cancer. Genes amplified in cervical cancer were MYCN (39.1%), ERBB2 (34.7%), and MYCL1 (30.4%); showed higher amplification in high-grade lesions and cervical cancer in relation to low-grade lesions and normal cytology with statistically significant differences. Besides the genes, C-MYC, EGFR, and AKT2 were amplified in samples from patients with cervical cancer by 12%, 18%, and 13%, respectively; we did not find statistical differences.Conclusion: Higher prevalence of gene amplification and HPV was found in high-grade cervical lesions and cervical cancer.

Introducción: El cáncer cervical es el segundo cáncer más importante en mujeres a nivel mundial y es la segunda causa de muerte por cáncer en mujeres. Se ha demostrado que el proceso de carcinogénesis cervical presenta componentes tanto genéticos como epigenéticos y medio ambientales. En la actualidad, hay gran interés en la búsqueda de marcadores moleculares asociados con la progresión de esta enfermedad, uno de los posibles mecanismos y que además está poco estudiado en cáncer cervical es la amplificación génica de algunos oncogenes como la familia MYC, EGFR y AKT entre otros.Objetivos: Detectar la amplificación génica de MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 además de la presencia del virus de papiloma humano en cepillados cervicales en mujeres con citología normal o con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II y III o con cáncer cervical.Métodos: Se genotipificó mediante reverse line blot (RLB) el virus de papiloma humano (VPH) y se determinó el estado de amplificación génica de los genes mencionados mediante PCR en tiempo real utilizando sondas taqman.Resultados: El VPH se encontró presente en 4% de las pacientes con citología normal, en 48% en NIC I, 63.6% en NIC II, 64% en NIC III y 70.8% en cáncer cervical. Los genes MYCN, MYCL1 y ERBB2 mostraron mayor amplificación en lesiones de alto grado y cáncer con diferencias estadísticamente significativas a las lesiones de bajo grado y citología normal, en 39.1%, 34.7% y 30.4% respectivamente. Además, se encontraron amplificados los genes C-MYC, EGFR y AKT2, en muestras de pacientes con cáncer cervical, en 12%, 18% y 13% respectivamente. Sin embargo, no se observaron diferencias estadísticamente significativas con respecto a las lesiones de alto y bajo grado y citología normal.Conclusión: En las lesiones de alto grado como en cáncer cervical, se encuentra mayor prevalencia del virus al igual que se detectan mayor cantidad de alteraciones genéticas como la amplificación génica.

Detección de mutaciones en los genes K-ras, H-ras y EGFR en muestras de plasma sanguíneo y cepillado cervical de pacientes con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) III y cáncer de cuello uterino / Detection of genes mutations in the K-RAS, H-RAS and EGFR in samples of blood plasma and cervical smears for patients with cervical intraepithelial neoplasia III and cervical cancer

Introducción: El cáncer cervical es el segundo cáncer más importante en mujeres a nivel mundial y la segunda causa de muerte en mujeres por cáncer. Se ha demostrado que el proceso de carcinogénesis cervical presenta componentes tanto genéticos, epigenéticos y medio ambientales. En la actualidad, muchos estudios se encaminan en la búsqueda de marcadores moleculares como mutaciones en oncogenes y/o genes tumor supresor que se asocien con la progresión de esta entidad. Los genes candidatos más estudiados en cáncer cervical en distintas poblaciones han sido H-ras, K-ras, EGFR entre otros. Objetivos: Se identificó el virus de papiloma humano (VPH) genérico y específico en el ADN libre de plasma y de cepillado cervical de pacientes con cáncer cervical invasivo y con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) III además de evaluar alteraciones genéticas, como mutaciones en los genes H-ras, K-ras y EGFR. Metodología: Para ello se detectó el VPH genérico mediante PCR con los iniciadores GP5+/GP6+, y específico para VPH 16 y 18 en la región E6/E7. Para detectar las mutaciones en el codón 12 de H-ras, codones 12 y 13 de K-Ras y el exón 21 de EGFR se realizó mediante secuenciación directa de los productos de PCR de estos fragmentos génicos. Resultados: Obteniendo una buena correlación entre las muestras de plasma sanguíneo y los cepillados cervicales, tanto para los hallazgos de VPH p=0.0374 como para las mutaciones evaluadas p=0. En general, para EGFR en el exón 21 no se encontraron mutaciones, al igual que para los codones 12 y 13 en K-ras y codón 12 en H-ras. Conclusión: El uso del ADN presente en el plasma puede ser relevante para el análisis de mutaciones y de la presencia de marcadores tumorales cuando no se dispone de otras muestras.

Introduction: Cervical cancer is the second most important cancer in women worldwide, and the second cause of cancer death in women. It has been shown that the process of cervical carcinogenesis presents as genetic and epigenetic components as environmental issues. At present, many studies are addressed in searching for molecular markers such as mutations in oncogenes and/or tumor suppressor genes that are associated with the progression of this disease, the most studied candidate genes in cervical cancer in different populations have been H-ras, K-ras, EGFR among others. Objective: The present study identified human papilloma virus (HPV) generic and specific in DNA-free plasma and cervical smears of invasive cervical cancer patients and patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) III in addition to assessing genetic alterations, such as mutations in the genes H-ras, EGFR and K-ras. Methods: To do so generic HPV was detected by PCR with primers GP5+/GP6+, and specific HPV 16 and 18 in E6/E7 region; to detect mutations in codon 12 of  H-ras, codons 12 and 13 of K-ras and EGFR exon 21 was conducted by direct sequencing of PCR products of these gene fragments. Results: Getting a good correlation between samples of blood plasma and cervical smears for both; the findings of HPV p=0.0374 and evaluated mutations p=0. In general, for EGFR in exon 21 mutations were not found, as for codons 12 and 13 in K-ras and codon 12 in H-ras. Conclusion: The use of DNA in plasma may be relevant to the analysis of mutations and the presences of tumor markers are not available from other samples.

Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis / Obtention, purification and characterization of IgY polyclonal antibodies, developed in hens,

Introducción. El desarrollo de anticuerpos policlonales requiere de animales de laboratorio, generalmente, el conejo, que deben sangrarse para su obtención. Como alternativa, se han utilizado las gallinas. Objetivo. Desarrollar anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia duodenalis y evaluar diferentes métodos para su purificación a partir de yema de huevo. Materiales y métodos. Se inmunizaron tres gallinas intramuscularmente con trofozoítos del parásito: las inmunizaciones se realizaron a los 0, 15, 30, 45, 60, 90 y 120 días. Se recolectaron huevos en cada etapa de la inmunización y se purificó la IgY por deslipidación (D) y precipitación(P) mediante cinco protocolos diferentes: M1: (P: sulfato de amonio/D: dextrán sulfato-cloruro de calcio), M2: (D: dextrán sulfato-cloruro de calcio/P: sulfato de amonio), M3: (D: cloroformo/ P: sulfato de amonio 50 por ciento), M4: (D: solución A/P:solución B) y M5: (D: cloroformo/P: sulfato de amonio 30 por ciento). Se realizó evaluación inmunoquímica de la IgY anti- Giardia duodenalis mediante inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis e inmunoelectrotransferencia ( Western blot); la pureza de IgY por SDS-PAGE en presencia y ausencia de reductor y la concentración de la inmunoglobulina (mg/mL) por espectrofotometría y densitometría. Resultados. La IgY anti- G. duodenalis mediante evaluación inmunoquímica presentó títulos hasta de 1:32. La inmunoglobulina en ausencia de reductor mostró una banda de 180 kd y en su presencia bandas de 30 y 68 kd, características de sus cadenas liviana y pesada, respectivamente. Las mayores concentraciones de inmunoglobulina se recuperaron con el método dos (M2), 4,6 mg de IgY por mL de yema de partida. Conclusiones. Por su facilidad y economía de producción en gallinas, los anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia así obtenidos podrán utilizarse para desarrollar inmunoensayos que detecten el parásito en eluídos de heces

Prevalencia de microscoporidios y otros parásitos intestinales en pacientes con infección por VIH, Bogotá, 2001 / Prevalence of microsporidia and other intestinal parasites in HIV infected patients from Bogotá[ a 2001 survey

Los parásitos intestinales oportunistas son protozoos que causan diarrea en pacientes infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). Para determinar la prevalencia de microsporidios y otros par sitos oportunistas intestinales en pacientes infectados con el VIH con síntomas gastrointestinales y sistémicos, se estudiaron 115 pacientes que durante el 2001 consultaron al Hospital Santa Clara (33,0 por ciento), Clínica San Pedro-ISS (20,0 por ciento), Hospital Simón Bolívar (14,8 por ciento), San José (13,9 por ciento), Central de la Policía (6,1 por ciento), Compensar (5,2 por ciento), Liga de Lucha contra el Sida (2,6 por ciento), Hospital San Ignacio (2,6 por ciento) y Hospital Militar (1,7 por ciento). La edad promedio fue de 36 años con un rango de 18 a 71 años; 14 eran mujeres y 101 hombres. La metodología empleada fue la recolección por paciente de dos muestras de materia fecal seriadas para montaje directo, concentración, coloración de Zielh Neelsen modificada para diagnóstico de coccidios intestinales y coloraciones de cromotropo modificada, Gramcromotropo y calcoflúor para diagnóstico de microsporidios. La prevalencia de oportunistas fue de 10,4 por ciento para Cryptosporidium sp. En cuanto a microsporidios, se encontró que de 29 por ciento de positividad con cromotropo modificada como tamizaje, tan sólo 3,5 por ciento de las muestras se confirmaron como positivas con técnicas de calcoflúor y Gram-cromotropo. La prevalencia general de par sitos intestinales fue de 59,1 por ciento, de los cuales los principales patógenos fueron Blastocystis hominis con 25,2 por ciento y Entamoeba histolytica con 13 por ciento. En otros estudios con pacientes inmunosuprimidos por el VIH en Colombia, se han encontrado prevalencias de Cryptosporidium sp. menores que la hallada en esta investigación.